Přátelé, kteří provádějí experimenty související s buňkami, musí často používat metody zmrazení buněk. Stručně řečeno, zmrazené skladování buněk má zachránit buňky v prostředí s nízkou teplotou, aby se dosáhlo účelu dlouhodobého uchování. Buňky budou mít během procesu přenosu určitý stupeň mutace. Aby bylo zajištěno, že buňky mohou být stále použity v případě buněčného znečištění a mutace, některé buňky se obvykle používají pro zmrazení.
Princip zmrazení buněk
Jedním z principů procesu zmrazení a obnovy buněk je „pomalá zmrazená fúze“, aby se maximálně ušetřila vitalita buněk. Jednoduše řečeno, musí být pomalý, když zmrazuje a chladí, a musí se rychle ohřívat, když se zotavuje z nízké teploty. Důvodem pomalého zmrazování je to, že pokud jsou buňky umístěny přímo v prostředí s velmi nízkou teplotou, jako je tekutý dusík, buňky tvoří velké ledové krystaly, které buňky poškodí.
Pokud jej zmrazíte pomalu, mohou být buňky pomalu dehydratovány, aby bylo dosaženo účelu ochrany buněk. Kromě toho má při obnově také zabránit tomu, aby malé ledové krystalky vytvořily velké ledové krystaly, tedy těžké krystaly ledových krystalků. Proto, když každý obvykle provádí zmrazení buněk, vždy to způsobí, že buňky utrpí ztráty, což pravděpodobně bude mít dopad v kroku zmrazení.
Několik metod zmrazení buněk
Manuální metoda: Zmražené buňky se obvykle skladují v kapalném dusíku. Manuální provozní metoda spočívá v ochlazení gradientu v chladničce. Buňky uložte do zkumavky pro zmrazení a vložte je do chladícího prostředí o teplotě 4 °C, -20 °C, -80 °C v daném pořadí. Zmraženo na 24 hodin při -80 stupni C a poté převedeno do kapalného dusíku. Manuální chlazení nevyžaduje dodatečné doplňování dalšího spotřebního materiálu. Lze jej ovládat ručně. Je to nejjednodušší, ale není to jednoduché. Skutečný provoz je problematický. A efekt není příliš dobrý, protože tento způsob chlazení stále není jednotný a není nutně použitelný pro křehčí buňky.
Gradientní chladicí box: Gradientní chladicí box prodávaný na trhu se používá speciálně pro rovnoměrné chlazení mrazícího procesu. Rychlost chlazení je obvykle -1 stupňů za minutu. Vložte zmraženou skladovací trubici do gradientového chladicího boxu a umístěte gradientový chladicí box přímo do chladícího prostředí s teplotou -80 stupně C, abyste strávili noc bez ručního ovládání gradientu. Poté spusťte depozitní trubici a vložte ji do kapalného dusíku. Efekt použití gradientních chladicích boxů je lepší, protože komerční chladicí boxy na trhu dokážou zajistit zhruba rovnoměrnou rychlost chlazení.
Na trhu jsou dva běžné gradientní chladicí boxy. Potřeba přidat isopropyl, obvykle tělo krabice PC. Při použití přidejte isopenol do měřítka v krabici při použití. Isopropanol se používá jako nosič pro akumulaci a distribuci tepla.
Jiný druh se nemusí přidávat isopropyl, pěna a mrazák lze umístit přímo během používání, což je pohodlnější na ovládání.
Chladicí box isopropanolu se doporučuje vyměnit po několikanásobném použití, ale protože isopropanol je škodlivá kapalina, která poškozuje experimenty a životní prostředí, lze jej obvykle použít vícekrát. Je však nutné zajistit, aby kapalina byla v určitém množství.
Neprogramované zmrazené úložiště: Používejte neprogramované zmrazené tekutiny, které lze zakoupit na trhu. Ve srovnání s tradiční zmraženou kapalinou může vnitřní součást snížit poškození buněk ledového krystalu, takže není potřeba využívat gradient k ochlazování ani nepotřebuje gradientní chladicí box. Mražený sklad lze umístit přímo do prostředí chladničky s teplotou -80 °C.
Mnoho vzorků buněk je velmi cenných. Kromě nás ho musíme používat při provádění experimentů. V souvisejícím výběru produktů si také musíte co nejvíce vybrat dobré produkty. Vyberte mrazicí skladovací zkumavku s kvalifikovanou kvalitou, zkuste pro zmrazení použít nástroj gradientního chlazení a maximalizujte záruku nízkého poškození buněk, abyste se vyhnuli malým ztrátám způsobeným drobnými.