Základní podmínky pro buněčnou kulturu
1. Vhodné buněčné kultivační médium
Vhodné buněčné kultivační médium je jednou z nejdůležitějších podmínek pro buněčný růst a proliferaci in vitro. Kultivační médium poskytuje buněčnou výživu a základní látky pro podporu buněčného růstu a proliferace, ale také poskytuje živé prostředí pro růst a reprodukci kultivovaných buněk.
2. Vysoce kvalitní sérum
V současné době většina syntetických médií vyžaduje přidání séra. Sérum je jednou z nejdůležitějších složek buněčného kultivačního média, které obsahuje různé růstové faktory a další živiny potřebné pro buněčný růst.
3. Konstantní teplota růstu buněk
Pro udržení energického růstu kultivovaných buněk musí existovat stálá a vhodná teplota.
4. Vhodné plynové prostředí
Plyn je jednou z nezbytných podmínek pro přežití savčích buněk a požadovanými plyny jsou především kyslík a oxid uhličitý.
5. Teplota buněčné kultury
Pro udržení energického růstu kultivovaných buněk musí existovat stálá a vhodná teplota. Různé typy buněk mají různé požadavky na teplotu kultivace. Standardní teplota pro kultivaci lidských buněk je 36,5 stupně ± 0,5 stupně . Odchylka od tohoto teplotního rozsahu ovlivní normální metabolismus buněk a dokonce zemře.
6. Vhodné plynové prostředí
Plyn je jednou z nezbytných podmínek pro přežití savčí buněčné kultury a požadovanými plyny jsou především kyslík a oxid uhličitý. Kyslík se účastní cyklu trikarboxylových kyselin, produkuje energii pro buněčný růst a proliferaci a syntetizuje různé složky potřebné pro buněčný růst.
Běžná kontaminace buněčné kultury
1. Bakteriální kontaminace
Nejběžnější je bakteriální kontaminace. Jakmile je operace mírně nesprávná, způsobí kontaminaci buněk. Po bakteriální kontaminaci se při pozorování pod mikroskopem jeví jako černé tenké proužky písku. Tyčinkovité atd. Za druhé, kultivační médium zežloutne a zakalí, v Petriho misce jsou zřetelně vidět jemné písčité sedimenty a čas od času je cítit zvláštní zápach.
2. Plísňová kontaminace
Kultivační roztok kontaminovaný plísněmi je čirý a průhledný, ne jako velké propuknutí bakteriální infekce, takže je obtížné ji včas odhalit. Někdy to pod mikroskopem vypadá jako vlákno, někdy to vypadá jako korál a pomalu vyroste velmi tenké černé vlákno. Když je příliš pozdě, je pro buňky obtížné zachránit.
3. Kontaminace plísní
V souladu s houbovými infekcemi, protože kultivační médium je čiré, je obtížné zjistit plísňovou kontaminaci brzy, když je často příliš pozdě. V kultivačním médiu se pomalu objevovaly vločkovité nečistoty a pod mikroskopem byly vidět plovoucí objekty vláknité hmoty, jako jehnědy ve větru. Buňky mohou stále růst, ale časem se buňky zhorší a přestanou růst.
4. Mykoplazmová infekce
Kultivační médium se zakalí. Poté, co mykoplazma infikuje buňky, nejsou cytopatické změny patrné, ale stav buněk se zhoršuje a růst se zpomaluje. Pod mikroskopem mohou být malé černé skvrny, ale kultivační médium obecně není zakalené. Po pasážování buněk se objevily mezibuněčné černé skvrny, buňky byly vakuolizovány a mnoho buněk připomínalo apoptózu a nekrózu. Nakonec buňky plavaly a úplně zemřely.
Prevence kontaminace buněk
Stanovení dobrých pravidel a předpisů může výrazně přispět ke snížení kontaminace buněk. Včetně přístupového systému, provozních norem a systému denní správy.
Přístupový systém: včetně personálu a materiálu. Před vstupem do laboratoře musí být personál proškolen a musí splňovat požadavky na nošení, jako jsou bílé pláště, izolační pláště, masky, rukavice atd. U potřebných položek by měly být přísně zakázány předměty na jedno použití. sterilizované a sterilizované a zakoupené položky je třeba nakupovat z pravidelných a spolehlivých kanálů. Nově zakoupené články by měly být před použitím otestovány a ověřeny.
Provozní specifikace: Nejlepší je formulovat specifikace pro rutinní operace a laboratorní personál se musí řídit provozními specifikacemi, které nelze libovolně měnit, a také pěstovat dobré provozní návyky laboratorního personálu. Například po nasátí špičky pipety se podruhé nevysune do média a jednou se nasaje dostatečné množství média. Při přidávání kapaliny by měla být kapalina přidána co nejvíce v suspenzi, což může účinně zabránit kontaminaci mykoplazmaty a křížové kontaminaci buněk. Kromě toho, pokud je to možné, provozujte vždy pouze jednu buněčnou linii a je lepší mít mezi buňkami malý časový interval, aby se zabránilo křížové kontaminaci.
Systém denního řízení: Zahrnuje pravidla a metody pro používání, čištění a údržbu prostředí a spotřebního materiálu, činidel atd. Existuje také řízení spotřeby, zásob a pořizování činidel a spotřebního materiálu, včetně dvouúrovňového řízení zásob vzorky buněk. U zdrojů kontaminace, které není snadné najít, je nejlepší provádět pravidelné testování, zejména mykoplazmové kontaminace a buněčné křížové kontaminace.
BKMAM Bio poskytuje odpovídající spotřební materiál pro buněčnou kulturu:
Jednorázové plastové kulaté/čtvercové Petriho misky:
Vysoce transparentní polystyrenový materiál (PS);
Povrch je hladký a plochý a pod mikroskopem nedochází k žádnému optickému zkreslení buněk;
Stohovací design usnadňuje stohování a skladování;
sterilizace ethylenoxidem (EO);
Odolnost proti opotřebení a korozi.
Adherentní ošetření misek pro buněčné kultury:
Polystyrenový materiál (PS);
Sterilizace elektronovým paprskem, žádný pyrogen, žádný toxin;
Vakuová plazmová povrchová úprava, vynikající adheze buněk;
Povrch je hladký a plochý a pod mikroskopem nedochází k žádnému optickému zkreslení buněk;
Stohovatelné provedení usnadňuje stohování a skladování.
Plastové destičky pro buněčné kultury:
Polystyrenový materiál (PS);
Vhodné pro normální buněčné kultury, neadherentní typ ošetřovací destičky;
Bez pyrogenu, bez toxinu, sterilizováno;
Nezávislé balení snadného roztržení, snadné ovládání;
Adherentní ošetření destiček pro buněčné kultury:
Polystyrenový materiál (PS);
Adherentní ošetření (TC treatment) typ destičky, vhodný pro kultivaci adherentních buněk;
Bez pyrogenu, bez toxinu, sterilizováno;
Nezávislé balení snadného roztržení, snadné ovládání;
Všechny jsou ploché.
Adherentní ošetření lahví pro buněčné kultury:
Polystyrenový materiál (PS);
Sterilizace elektronovým paprskem, žádný pyrogen, žádný toxin;
Vakuová plazmová povrchová úprava, vynikající adheze buněk;
Prodyšný obal, který napomáhá výměně plynů a zabraňuje průchodu mikroorganismů.
Vnitřní/externí spinové kryozkumavky:
100% čistý polypropylenový materiál (PP);
Odolá 15psi, 121 stupňů sterilizace;
Stěna tuby je zesílená a tělo tuby má měřítko a oblast pro psaní;
Mezi závitem krytu potrubí a tělem potrubí je silikonové kroužkové těsnění pro zajištění těsnosti;
Žádná DNáza, žádná RNáza, žádný pyrogen, žádný endotoxin.
